La Diocesi di Montepulciano- Chiusi- Pienza nasce il 30 Settembre 1986 a seguito della politica vaticana di unificazione delle diocesi al di sotto dei 100.000 abitanti.

Delle tre, quella più antica è la Diocesi di Chiusi che, grazie alla sua collocazione sulla via Cassia, che collegava Roma alle città del nord, fu evangelizzata sicuramente già nel III secolo, come attesta la presenza delle catacombe di Santa Caterina e Santa Mustiola, martirizzata durante la persecuzione dell’imperatore Aureliano nel 274 o, più probabilmente, durante quella di Valeriano negli anni tra il 257 e il 258.
Il culto della santa è documentato già nel IV secolo: l’epigrafe sepolcrale di Julia Asinia Felicissima nelle catacombe la dice “ex genere Mustiolae sancta”, ossia della stessa gens della santa morta martire a Chiusi.

La prima attestazione dell’esistenza d’una sede episcopale a Chiusi si ha nelle catacombe di santa Mustiola con a lapide sepolcrale del Vescovo Lucio Petronio Dester, morto nel 322.
La Diocesi di Chiusi nel corso dei secoli ha perso molti dei suoi territori soprattutto a seguito della creazione delle diocesi di Pienza nel 1462 e di Montepulciano nel 1561.

La Diocesi di Pienza nasce per volontà del suo più illustre figlio, Enea Silvio Piccolomini, papa Pio II, originario proprio del borgo di Corsignano, che la dotò di territori appartenenti alla diocesi di Chiusi ed Arezzo. Per oltre un secolo i Vescovi di Pienza furono tutti appartenenti alla famiglia Piccolomini.

Nel 1772 con una bolla, papa Clemente XIV unificò le diocesi di Chiusi e di Pienza sotto lo stesso Vescovo.